经常做蛋白研究的小伙伴肯定知道，在探索靶蛋白的功能、定位或结构时，我们需要使用抗体检测来确定蛋白表达、定位、或蛋白互作等情况。但实验过程中常会遇到一些瓶颈，包括靶蛋白无特异性抗体、不稳定易降解、内源表达水平低等。
将多肽或蛋白作为标签，与靶蛋白共表达可以很大程度地解决上述问题。
顾名思义，标签抗体（Tag antibodies）利用抗原--抗体特异性反应结合对应的标签融合蛋白，通过检测或纯化带有相应标签序列的融合蛋白，籍以分析靶蛋白的功能、定位和结构等。
看似简单的标签抗体暗藏哪些玄机？
小P系统性总结了我们常使用的标签和它们的抗体，希望能使相关蛋白的研究更加容易。

标签抗体根据性质及用途可以分为三类：多肽标签、亲和标签和荧光蛋白标签。

01 多肽标签
（1）DYKDDDDK tag
大小（肽序列）：8个氨基酸（1.0 kDa）
Point：DYKDDDDK（也被称为Flag）多肽序列已广泛用作表达载体的通用标签，常构建于目的蛋白的N端或C端，转染细胞，以研究蛋白的功能。由于其亲水性，DYKDDDDK多肽常位于融合蛋白的表面，更容易和抗体合结合。在免疫沉淀实验中，3个串联的DYKDDDDK多肽序列表现出更显著的效果。
DYKDDDDK tag抗体：
兔多抗：20543-1-AP            鼠单抗：66008-4-Ig           重组兔单抗：80745-1-RR

Different loading amount of DYKDDDDK tagged-TDP43 transfected HEK-293 cells were subjected to SDS PAGE followed by western blot with 66008-4-Ig



IF analysis of (-20°C Ethanol) fixed transfected HEK-293 cells using 66008-4-Ig
 

（2）6×His tag

大小（肽序列）：6个氨基酸（0.8 kDa）（HHHHHH）

Point：在特定的缓冲条件下，His多肽序列容易和几种金属离子结合，包括镍、钴、铜等。His融合蛋白常使用镍柱等金属螯合柱进行纯化。

His tag抗体：

兔多抗：10001-0-AP           鼠单抗：66005-1-Ig

Western blot of 6*His-tagged fusion protein with anti-6*HIS tag (66005-1-Ig) at various dilutions
 

（3）HA tag

大小（肽序列）：9个氨基酸（1.1 kDa）（YPYDVPDYA）

Point：来源于流感病毒表面糖蛋白（即血凝素）的多肽序列，对目的蛋白的空间结构、生物活性及空间分布影响较小。

HA tag抗体：

兔多抗：51064-2-AP          鼠单抗：66006-2-Ig              重组兔单抗：81290-1-RR

HA-tagged recombinant protein, non-transfected HEK-293 cells, transfected HEK-293 cells were subjected to SDS PAGE followed by western blot with 81290-1-RR


Immunofluorescent analysis of (-20°C Ethanol) fixed transfected HEK-293 cells using 81290-1-RR
 

（4）Myc tag

大小（肽序列）：10个氨基酸（1.2 kDa）（EQKLISEEDL）

Point：Myc标签是来源于原癌基因c-Myc表达产物的多肽序列，可构建在目标蛋白的N端或C端，以便对目的蛋白进行分离或检测。

Myc tag抗体：

兔多抗：16286-1-AP      鼠单抗：60003-2-Ig       Chromotek®纳米抗体：yt

 

Western blot of Myc-tagged fusion protein with anti-Myc tag (60003-2-Ig) at various dilutions

 

（5）V5 tag

大小（肽序列）：14个氨基酸（1.4 kDa）（GKPIPNPLLGLDST）

Point：来源于猿猴病毒5（Simian virus 5，SV5）P蛋白和V蛋白的多肽序列。

V5 tag抗体：

兔多抗：14440-1-AP         Chromotek®纳米抗体：v5t

V5 tagged fusion protein (20ng/lane) subjected to SDS PAGE followed by western blot with 14440-1-AP at different dilution


 

（6）S1 tag

大小（肽序列）：9个氨基酸（1.0 kDa）（NANNPDWDF）

Point：来源于乙型肝炎病毒preS1的多肽序列，该标签广泛应用于各种蛋白质表达系统。

S1 tag抗体：

鼠单抗：66165-1-Ig

 

02 亲和标签 

（1）GST tag 谷胱甘肽 S-转移酶（Glutathione S-transferases，GST）

大小：26 kDa

Point：GST来源于日本血吸虫，能增加目的蛋白的可溶性，在大肠杆菌中大量表达。因GST与谷胱甘肽的结合特性，常用于蛋白的亲和纯化。

GST tag抗体：

鼠单抗：66001-2-Ig       重组兔单抗：80006-1-RR         Chromotek®纳米抗体：st

GST tagged recombinant protein (25ng/lane) was subjected to SDS-PAGE followed by western blot with anti-GST tag monoclonal antibody 66001-2-Ig at various dilutions

 

（2）MBP tag 麦芽糖结合蛋白（Maltose-Binding Protein，MBP）

大小：43 kDa

Point：MBP来源于大肠杆菌，因MBP与直链淀粉的结合特性，常用于蛋白的亲和纯化。

MBP tag抗体：

兔多抗：15089-1-AP

鼠单抗：66003-1-Ig

Chromotek®纳米抗体：mbt

 

03 荧光蛋白标签 

（1）GFP tag 绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein，GFP）

大小：27 kDa

Point：来源于维多利亚发光水母，GFP基因常用做报导基因，可以在荧光显微镜下直接观察到GFP融合蛋白的细胞定位，也可观察到GFP融合蛋白稳转的模式动物中相应蛋白的空间分布。因其荧光可以在活细胞中可视化，GFP已成为细胞生物学研究中的宝贵工具。

GFP tag抗体：

兔多抗：50430-2-AP       鼠单抗：66002-1-Ig           Chromotek®纳米抗体：gfms，gfrb，gt

HeLa cells transiently expressing Mannosidase II-EGFP were immunostained with GFP recombinant antibody（gfms） 

 

（2）mNeonGreen tag

大小：27 kDa

Point：来源于文昌鱼，是目前亮度最强的单体黄绿色荧光蛋白之一。

mNeoGreen tag抗体：

Chromotek®抗体：32f6，nfms，nfr，nt

Immunostaining of HeLa cells transiently expressing mNeonGreen fused to Actin Chromobody (green) with 32F6 anti-mNeonGreen antibody (red)

 

（3）RFP tag 红色荧光蛋白（Red fluorescent protein，RFP）

大小：27 kDa

Point：来源于海葵，RFP蛋白因其发光特性，也常用做报导基因。

RFP tag抗体：

兔多抗：28063-1-AP         鼠单抗：67378-1-Ig             Chromotek®抗体：pabr1、rt

 

（4）mCherry tag

大小：27 kDa

Point：来源于海葵，是第二代单体红色荧光蛋白，亮度和光稳定性相较于第一代有提升。

mCherry tag抗体：

兔多抗：26765-1-AP         鼠单抗：68088-1-Ig

IF Staining of Transfected HEK-293 using 26765-1-AP

 

 

04  相关产品推荐 

标签抗体可特异性识别特定标签，并对其鉴定与纯化，以达到研究的需求。小P总结了常用标签的兔多抗、鼠单抗、重组兔单抗以及HPR、Biotin、FITC、CoraLite®染料系列的标记抗体，此外还有Chromotek®特色标签抗体——纳米抗体可供选择。希望能够对您的实验有所帮助！

标签抗体列表


Chromotek®特色标签抗体列表