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免疫荧光(IF)常用细胞器标记物指南!

人阅读 发布时间:2023-07-19 10:12

上期我们提到,要想获得优秀的荧光图像,我们需要科学的方案、熟练的操作、精密的仪器和高品质的染料。

没错,这些的确可以保证你获得一张出彩的免疫荧光图像,但是仅仅看见你的靶标还不够,我们还要知道你的蛋白在细胞中的具体位置。

因此我们需要一个点亮细胞结构,标记细胞位置的工具——细胞器标记物(cell-organelle-marker)。

 

细胞器标记物(cell-organelle-marker)
 

也称作细胞器 marker。一般采用某个细胞器或者亚细胞结构的基本组成成分或关键活性蛋白作为细胞器 marker,它的存在可以反映该亚细胞结构的位置甚至形状。

通过荧光抗体分别定位靶标蛋白和细胞器标志物蛋白,我们可以判断靶标蛋白的亚细胞定位,同时探究其参与的生物学进程。在细胞器分离提取物的免疫印迹(WB)研究中,细胞器 marker 也可用作阳性对照。

细胞器标记物对免疫荧光实验数据如此重要,那么常见的、典型的细胞器标记物有哪些呢?

本期小 P 给大家做了个汇总,同时咱们也新制作了一张常用细胞器标记物海报(海报见文末),有需要的同学可以保存收藏 ~
 

1. 细胞核 marker
 

细胞核(Nucleus)是遗传信息的主要储存部位,也是整个细胞的控制中心。在细胞核里面,包含大量的组蛋白和各种遗传相关酶以及表观遗传相关酶,他们均可作为细胞核 marker。

其中,组蛋白 Histone H3 和 Histone H2A.X 是最为常见和广泛使用的两个细胞核 marker 之一。



 

2. 核仁 marker
 

核仁(Nucleolus)是细胞核内的一种由核酸和蛋白质组成的致密小体。绝大多数真核细胞均具有核仁,数目 1-2 个,甚至多个。核仁的主要功能是 rRNA 的合成、加工与成熟以及核糖体亚单位的组装。

核仁纤维蛋白(FBL)、MKI67(FHA 域)结合核仁磷蛋白(NIFK)、核仁素(NCL)和 NOP2 核仁蛋白(NOP2)都是典型且常用的核仁 marker。

 


 

 

3. 核膜 marker
 

核膜(Nuclear envelope)的有无是区分真核细胞和原核细胞的主要特征之一。真核核膜对核内外物质的进出有高度选择性,控制着细胞核内外物质和信息的交换传输。

核纤层蛋白 LaminB、LaminA/C 是核膜内侧核纤层的主要组成成分,也会与其他蛋白一起锚定在核膜上,通常被用作核膜 marker。


 

 

4. 内质网 marker
 

内质网(ER,Endoplasmic reticulum)是蛋白质合成、折叠、组装、修饰、运输的重要场所,同时它还参与脂质和糖类代谢, 也是细胞内储存 Ca2+的主要场所。

钙联蛋白(Calnexin)、钙网蛋白(Calreticulin)、内质网蛋白(ERp72)、葡萄糖调节蛋白 94(GRP94)和蛋白二硫键异构酶(PDI)主要定位于内质网中,都是常用的内质网 marker。

 

 

5. 高尔基体 marker
 

高尔基体(Golgi apparatus)是由数层重叠的扁平囊泡、若干大、小泡组成的膜性结构,其主要功能将内质网合成的蛋白进行加工、分拣与运输,然后分门别类地送到细胞的特定部位或分泌到胞外。

高尔基体蛋白亚家族 A 成员 2(GOLGA2/GM130)、高尔基体重组堆积蛋白 2(GORASP2)、高尔基体蛋白 73(GP73/GOLPH2)、突触融合蛋白 6(Syntaxin 6)以及反式高尔基体网状结构蛋白 2(TGOLN2/TGN46)均是典型的高尔基体 marker。
 

 

 

6. 中心体 marker
 

中心体(Centrosome)是动物细胞的主要微管组织中心,一般由两个中性粒组成,呈垂直排列。它在细胞极性的产生、胞间运输以及细胞分裂过程中发挥着重要作用。

着丝粒蛋白 J(CENPJ)、中心体蛋白 110(CP110)、中心粒周围蛋白(Pericentrin)和微管蛋白-γ(Gamma Tubulin)是最常用的几种中心体 marker 之一。


 

 

7. 线粒体 marker
 

线粒体(Mitochondrion)是一种存在于大多数细胞中的双层膜细胞器,是细胞进行有氧呼吸的主要场所,也是细胞产生能量的主要源头。

凋亡诱导因子(AIF)、ATP 合成酶 H+转运线粒体 F1 复合体 α 亚基 1(ATP5A1)、细胞色素 c 氧化酶 IV(COXIV)、氨基甲酰磷酸合成酶 1(CPS1)、热休克蛋白 60(HSP60)、线粒体内膜蛋白(Mitofilin)、抗增殖蛋白(Prohibitin,又称抑制素)和电压依赖性阴离子通道蛋白 1(VDAC1/Porin),都是常用的线粒体 marker。

 

 

8. 核糖体 marker
 

核糖体(Ribosome)是细胞蛋白质合成的场所,主要由 rRNA 和蛋白质构成, 其功能按照 mRNA 指令,翻译多肽链,合成蛋白质。

核糖体蛋白 S3(RPS3)、核糖体蛋白 L4(RPL4)以及核糖体蛋白 L7(RPL7)都是典型的核糖体蛋白,也是最常用的几种核糖体 marker。


 

 

9. 溶酶体 marker
 

溶酶体(Lysosome)内含多种酸性水解酶,是细胞的消化器官,对内可将受损蛋白、细胞器降解,对外可抵御细菌病毒入侵,将外来物吞噬消化;实现资源的回收利用。

溶酶体相关膜蛋白 1 和 2(LAMP1、LAMP2)是最常用的两个溶酶体 marker。

 

 

10. 过氧化物酶体 marker
 

过氧化物酶体(Peroxisome)是一种高度动态、代谢活跃的细胞器,主要参与脂肪酸等脂质的代谢和氧化应激的调节。

过氧化氢酶(Catalase)、过氧化物酶体生物合成因子 1、5 和 14(PEX1、PEX5、PEX14)是最常见的过氧化物酶体 marker。

 



 

 

11. 内体 marker
 

内体(Endosome)是真核细胞中膜包裹的一种囊泡结构,它通过内吞作用而形成,参与以蛋白质为主的大分子分选、运输和降解。根据内吞的不同作用阶段,内体可被分为早期内体、晚期内体和循环内体。

RAB5 和 RAB11 都是是 Rab 小分子 GTP 酶家族成员,参与细胞内囊泡再循环途径,介导膜泡从内体向质膜的运输;早期内体抗原 1(EEA1)是一种与 RAB5 相互作用的蛋白, 因此他们都是常用的内体 marker。

 

 

12. 外泌体 marker
 

外泌体(Exosome)细胞分泌的一种细胞外囊泡,它能够将核酸、蛋白质和脂质在内的多种生物活性分子从供体细胞转移到受体细胞,介导细胞间通讯和分子转运。

白细胞分化抗原(CD9、CD63、CD81)以及肿瘤易感基因 101(TSG101)是比较常见的外泌体 marker。

注意:单一标记物无法确认外泌体,可通过「两阳一阴」标记物组合方案来锁定外泌体,具体组合方案可参考这篇文章:外泌体研究攻略 | 形成机理、分离鉴定手段、前沿应用进展,一文全 get!

 

 


13. 细胞骨架 marker
 

细胞骨架(Cytoskeleton)是普遍存在于真核细胞胞质中的蛋白质纤维网架结构,主要由微丝、微管和中间纤维构成。它在细胞的形态支持、形态建成、细胞内结构的组织与定位、细胞运动、内吞与外吐、胞内运输、细胞分裂、信息传递等过程中起着广泛而重要的作用。

微管蛋白 Alpha Tubulin 和 Beta Tubulin,波形蛋白 Vimentin 分别是微管结构和中间丝结构的组成成分,也是非常高频使用的细胞骨架 marker。


 

 

14. 细胞膜 marker
 

细胞膜(Plasma membrane)又被称为质膜,是包围于细胞表面的一层磷脂双分支层结构,是细胞的周界。与核膜一样,细胞膜也具有选择透过性,严格控制着膜内外的物质和信息交换。

β-连环蛋白(Beta catenin)是一种细胞骨架蛋白,主要位于细胞膜;钠钾 ATP 酶蛋白 A1(ATP1A1)一个 ATP 分解和细胞内外钠、钾离子转运相关的膜蛋白。二者常被用作细胞膜 marker。

 

 

15. 纤毛 marker
 

纤毛(Cilia)是一种进化上保守、突起于细胞表面的、由微管构成轴丝的毛发状细胞器。纤毛在细胞基本生命活动、组织稳态调节和动物胚胎发育等过程中发挥重要作用。

腺苷酸环化酶 3(ADCY3)、ADP 核糖基化因子样蛋白 13B(ARL13B)、纤毛内转运蛋白 20 和 88(IFT20、IFT88)以及乙酰化微管蛋白(Lys40)(Acetylated Tubulin (Lys40))均可被用于纤毛标记。

 


以上就是今天要和大家分享的 15 类细胞器和亚细胞结构标志物,为方便各位使用和收藏,小 P 这边还特别为大家制作了一份 [Cell organelle marker 海报],值得收藏哦 ~

 

最后,一份常用细胞器和亚细胞结构标志物抗体列表送给大家,每一个都经过了严格且多样化的质检,还有海量的文献引用数据支持,大家可以放心使用 ~

 

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